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结直肠癌是威胁我国居民健康的主要恶性肿瘤之一，而肝转移更是导致患者死亡的首要原因。尽管手术和放化疗不断进步，一旦肿瘤“定居”肝脏，治疗效果往往不尽如人意。

传统中医强调“清热解毒、化瘀散结”，仙连解毒方（XLJDD）正是基于这一理论形成的临床经验方。然而，它究竟如何阻断转移？哪些成分在起作用？南京中医药大学联合南京大学的研究团队在《Phytomedicine》上发表的最新成果，利用多组学技术和单细胞测序，为这个问题给出了系统而精细的答案。

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仙连解毒方的化学成分分析与质量控制

中药复方成分复杂，“黑箱”问题一直是机制研究的难点。研究团队首先采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）对仙连解毒方颗粒进行化学图谱分析。他们在正、负离子模式下共指认了40个特征峰，涵盖了多种黄酮、萜类及生物碱成分（图1）。这相当于为复方建立了一张“化学身份证”，确保后续动物实验中使用的药物批次稳定、成分清晰。特别值得注意的是，第19号峰被鉴定为环黄芪皂醇（cyclogalegenin），这个化合物在后续的机制验证中扮演了关键角色。

图1

仙连解毒方在结直肠癌肝转移小鼠模型中减轻转移负荷

有了质控基础后，研究者通过脾脏注射CT26结肠癌细胞构建了结直肠癌肝转移模型，模拟临床中肿瘤细胞经门静脉播散至肝脏的过程。给药三周后，模型组小鼠肝脏表面布满了肉眼可见的转移结节，肝组织结构被严重破坏；而仙连解毒方高剂量组（7.8 g/kg）肝脏上的转移灶明显减少，肝指数显著下降（图2B、D、E）。更重要的是，治疗组小鼠的体重没有出现明显下降，提示仙连解毒方在有效剂量下具有良好的耐受性。病理切片上，模型组肝脏几乎被肿瘤细胞“鸠占鹊巢”，而仙连解毒方组则保留了较为完整的肝小叶结构，同时转移灶内活化的caspase-3信号增强，表明药物诱导了肿瘤细胞凋亡（图2F-H）。打个比方，仙连解毒方就像一支训练有素的“拆违队”，把已经在肝里安营扎寨的癌细胞巢穴逐一清除，而且不伤及周边的正常邻居。

图2

整合转录组学与蛋白质组学分析确定Plaur/Hbegf轴为仙连解毒方的候选靶点

药物起效总得有个“下手”的地方。为了找到仙连解毒方的作用靶点，研究团队对肝转移组织同时进行了转录组和蛋白质组测序。两个层面的数据互相印证，极大提高了靶点筛选的可信度。经过比对，XLJDD处理组中同时下调的基因和蛋白共有四个——其中Hbegf是明确的差异分子，而Plaur则通过蛋白相互作用网络被锁定为核心节点（图3C-E）。后续qPCR和蛋白印迹验证也证实，仙连解毒方在体内确实能同时降低Plaur和Hbegf的表达（图3F-I）。有趣的是，公共数据库分析表明，PLAUR在结直肠癌组织中表达高于正常组织，在转移样本中更是“水涨船高”，且高表达患者的总生存期明显缩短（图3J-L）。这提示Plaur不仅是一个药物靶点，更是一个有临床预后价值的标志物。

图3

单细胞RNA测序揭示仙连解毒方减少Plaur高表达恶性亚群并促进干扰素反应性状态

肿瘤内部从来不是“铁板一块”。借助单细胞测序技术，研究者将肝转移灶中的恶性细胞进一步细分为多个亚群。其中，高表达Car6的一个亚群特别引人注意——它恰好是Plaur表达最高的群体。经过仙连解毒方治疗后，这个“高危亚群”的占比明显下降，而表达Ifit1（一类干扰素刺激基因）的亚群则显著增多（图4A-D）。拟时序分析也显示，仙连解毒方似乎改变了肿瘤细胞的分化路径，将它们从“促转移”状态推向一个对干扰素信号更敏感的状态（图4E）。转录因子分析进一步发现，治疗组中STAT1、IRF1、IRF7等干扰素相关调控子的活性明显增强（图4H）。可以说，仙连解毒方相当于在肿瘤内部进行了一场“人口结构调整”——削减了不安分的危险分子，让那些携带免疫激活信号的细胞逐渐占据上风。

图4

仙连解毒方破坏Plaur高表达恶性细胞与肿瘤相关巨噬细胞之间的促转移串扰

肿瘤微环境中的“帮凶”同样不能忽视。髓系细胞分析显示，肝转移灶中存在一群高表达Thbs1的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），而仙连解毒方处理后这群细胞的比例显著下降（图5A-C）。更重要的是，细胞通讯分析发现，Car6阳性恶性细胞与Thbs1阳性巨噬细胞之间存在明显的SPP1-CD44配体-受体交互，而仙连解毒方给药后这种“对话”显著削弱（图5H）。为了验证这个现象的因果关系，研究者在体外将Plaur过表达的CT26细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养，结果巨噬细胞的CD44、Arg1、Mrc1蛋白表达都跟着升高，说明癌细胞上的Plaur确实能通过SPP1信号“唆使”巨噬细胞向促肿瘤的M2型极化。这就像犯罪分子与接应者之间的暗号联系，仙连解毒方直接把信号中转站给切断了。

图5

Plaur敲低在体外损害结直肠癌细胞的迁移、侵袭和肌动蛋白细胞骨架重塑

为了单独评估Plaur对肿瘤细胞行为的影响，研究者构建了Plaur稳定敲低和过表达的CT26细胞系。划痕实验显示，敲低Plaur后细胞愈合速度明显减慢；Transwell侵袭实验也证实穿膜细胞数大幅减少（图6A-D）。进一步对敲低细胞进行转录组测序，再与体内仙连解毒方下调的基因取交集，共找到131个重叠基因。通路富集分析显示，这些基因高度富集在RHO家族GTP酶信号通路——正是调控肌动蛋白骨架和伪足形成的关键环节（图6E-F）。鬼笔环肽染色也直观地显示，Plaur敲低后细胞边缘的丝状伪足明显减少，细胞形态变得“笨拙”，迁移能力下降（图6H-I）。打个比方，失去Plaur的癌细胞像被卸掉了轮子的越野车，虽然引擎还在，但已经很难在组织中穿行。

图6

Plaur促进Mmp9相关的Hbegf释放，而仙连解毒方抑制EGFR/ERK信号和细胞骨架效应分子

Plaur本身是细胞膜上的受体，它如何将信号传递到细胞内部？研究发现，Plaur能调控MMP9的表达，而MMP9恰好在细胞外负责切割并释放HBEGF这一生长因子。在Plaur过表达的细胞中，HBEGF的分泌水平升高（图7A-D）；而在仙连解毒方治疗的肝转移组织中，MMP9、HBEGF、以及下游的EGFR和ERK磷酸化水平都被显著抑制（图7F-M）。同时，多个与细胞骨架相关的效应分子——包括FSCN1（肌动蛋白捆绑蛋白）和CDC42EP1（细胞极性调控因子）——在体内也随仙连解毒方处理而表达下调（图7E-I）。这条链条相当清晰：仙连解毒方按住Plaur，MMP9随之降低，HBEGF释放减少，EGFR/ERK通路“熄火”，最终细胞骨架无法重构，癌细胞就像失去触手的章鱼，爬不动也钻不透了。

图7

Plaur过表达在体内削弱仙连解毒方的抗转移效果

验证一个靶点的金标准是“回复实验”。研究者将Plaur过表达的CT26细胞注入小鼠脾脏，再用仙连解毒方高剂量进行治疗。结果一目了然：原本效果显著的仙连解毒方，在Plaur过表达组中几乎“失灵”，肝脏上仍密布转移结节，肝指数和转移灶数量均显著高于对照治疗组（图8A-C）。分子层面也一致，尽管给予同等剂量的仙连解毒方，Plaur过表达组中HBEGF、FSCN1、CDC42EP1的mRNA水平并未有效下降（图8D）。免疫组化进一步显示，Plaur过表达组的增殖指数（Ki67）持续偏高，而FSCN1阳性区域也未被仙连解毒方有效压制（图8F-K）。这个结果用大白话讲就是：Plaur相当于整个机制的“总开关”，一旦把它人为强行打开，仙连解毒方的药效就会大打折扣，反过来证明了仙连解毒方的抗转移作用确实在很大程度上依赖对Plaur的抑制。

图8

Cyclogalegenin是仙连解毒方中可到达组织的Plaur结合成分，并抑制Plaur表达

最后，一个不能回避的问题是：仙连解毒方成分复杂，究竟哪种成分真正钻进了肝转移灶并与Plaur握上了手？通过对含药血清和肝转移组织进行UPLC-MS/MS检测，研究者发现了多个可被吸收的化合物，其中环黄芪皂醇在肝转移组织中定量检出，平均浓度约为671.59 ng/g（图9A-B、J）。分子对接显示它能稳稳地嵌入Plaur的结合口袋，与ARG-48、GLU-91等残基形成相互作用（图9F）。表面等离子体共振和微量热泳动实验分别验证了两者直接结合，Kd值为36.74 μM（图9K-L）。更关键的是，环黄芪皂醇处理CT26细胞后，Plaur的mRNA和蛋白水平均呈浓度依赖性下降（图9G-I）。这说明环黄芪皂醇不仅是“能结合”，还能“反向下调”靶点表达，属于兼具靶向性和调控能力的活性成分。值得一提的是，柚皮素等其它吸收成分同样具有结合Plaur的潜力，提示仙连解毒方依然符合中药“多成分、多靶点”的协同特点，而非单一成分包打天下。

图9

小结

这项研究通过多组学联合分析、单细胞测序、体内外功能验证和化学生物学手段，完整讲述了仙连解毒方抗结直肠癌肝转移的故事主线：它通过环黄芪皂醇等活性成分直接结合并下调Plaur，一方面减少MMP9介导的HBEGF释放，关闭EGFR/ERK通路及下游细胞骨架重塑，直接削弱肿瘤细胞的迁移和侵袭能力；另一方面重塑肿瘤微环境，削减高危恶性亚群，并切断恶性细胞与巨噬细胞之间SPP1-CD44的促转移串扰，把微环境从“助纣为虐”转向“干扰素响应”状态。这个双重打击模型，既解释了仙连解毒方在动物模型上的显著疗效，也为今后将Plaur作为结直肠癌肝转移的治疗靶点提供了坚实的科学依据。

参考文献：Zhang Q, Shi Z, Qian J, Geng X, Tao Y, Dong D, Shi H, Zhang D, Sun Y, Cheng H. Xian-Lian-Jie-Du Decoction suppresses colorectal cancer liver metastasis by inhibiting Plaur/Hbegf/EGFR-mediated actin cytoskeleton remodeling. Phytomedicine. 2026 Jun 23;159:158482. doi: 10.1016/j.phymed.2026.158482. Epub ahead of print. PMID: 42372602.

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