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最近更新的临床标准治疗指南推荐对急性髓系白血病（AML）缓解期患者进行FLT3-ITD可测量残留病（MRD）检测。《Blood》近日发表配套的技术说明，提供了有关此类检测的实验室和临床建议。

主要建议

现在有大量证据表明，对于接受强化诱导化疗后达到形态学完全缓解的急性髓系白血病（AML）患者，检测到持续性FLT3-ITD与未检测到FLT3-ITD可测量残留病（MRD）的患者相比，后续复发和死亡风险增加（表1）。

鉴于基于DNA的二代测序（NGS）FLT3-ITD MRD检测优于流式细胞术，很多国家和国际临床指南均推荐将其用于预后和预测目的。为诊断目的设计的FLT3-ITD检测通常不具备MRD监测所需的足够灵敏度。尽管技术发展迅速，各个实验室可能会根据自己的需求进行创新和优化，但本文作者在2025年的一次会议上就当前FLT3-ITD NGS-MRD检测的最佳实践达成共识（表2）。

有多种方法可用于缓解期AML患者FLT3-ITD的超灵敏检测，但目前大多数临床数据都基于相似的检测策略（表1），该策略包括使用靶向FLT3基因近膜区（侧翼外显子14和/或15）的引物进行DNA聚合酶链反应（PCR）扩增，然后进行深度DNA测序。NGS为基础的AML MRD检测的检测限（LOD，定义为能够可靠检测到高于测定背景的最低浓度）受多种因素影响，包括FLT3-ITD的大小和位置，但用于文库制备的样本DNA量是一个关键的约束限制。考虑到约660 ng基因组DNA相当于100,000个人类细胞，再加上检测效率不完美和泊松分布采样因素，建议高灵敏度FLT3-ITD NGS-MRD检测的基因组DNA投入量不少于500 ng，理想情况下为700 ng。如果提交检测的标本不合格，实验室应与开单医生沟通。

FLT3-ITD的长度差异很大，范围从3到超过200个碱基对（bp），因此FLT3-ITD NGS-MRD检测应经过验证，能够检测全谱系的FLT3-ITD长度和插入位点。近期FLT3-ITD NGS-MRD研究报告的ITD长度最长达228bp（中位数：51bp），与通过毛细管电泳在成年AML患者诊断时观察到的FLT3-ITD长度分布一致。实验室应意识到对于非常长的FLT3-ITD可能存在假阴性MRD结果的风险，并选择合适的测序策略来减轻这种风险（表2）。

通常使用两种通用的PCR反应方法：一种是使用与测序接头和索引偶联的引物进行25个循环的PCR；另一种是先进行8个循环的FLT3特异性引物PCR，然后进行20-25个循环以添加测序接头和索引。考虑到索引跳跃风险，应使用唯一双索引（UDI） 以防止读段被分配到错误的样本。鉴于使用NGS检测FLT3-ITD的背景假阳性错误率较低，不需要进行纠错，但可以考虑使用唯一分子标签（UMI） 来改善低水平分子的定量。PCR是一种强大的技术，但非常容易受到污染。诊断或明确复发的样本不应与用于MRD的缓解期样本一起制备或测序；每批次应包含阴性对照样本；可以每批次或在测试运行中包含低水平阳性样本。毛细管电泳可用作初步筛选，以排除可能导致污染的强阳性样本。

生物信息学策略应预先定义，并且能够从头检测FLT3-ITD，而不仅仅是追踪初诊时鉴定出的FLT3-ITD。分析报告还应包括有关DNA投入量、样本来源、初诊时和所有检测的MRD时间点检测到的FLT3-ITD序列及其等位基因分数历史信息。通常来说，需要至少三个相同的突变读段才能做出FLT3-ITD阳性判定。应在每个时间点报告所有鉴定出的FLT3-ITD序列，理想情况下还应附上关于该患者既往检测到的（包括初诊时）FLT3-ITD序列的评论。

ELN-DAVID 不作商业推荐，但认为至少有一个国际协调和认可的商业参考实验室网络（美国、欧洲、中国、日本）可提供满足上述所有标准的商业FLT3-ITD NGS-MRD检测服务。实验室应确保其FLT3-ITD MRD检测的实施符合当地适用的经济、监管和法律要求。

除技术性实验室因素（表2）外，重要的临床考虑因素在其他地方有详细说明，但包括检测的临床时间点、计划中的检测后治疗干预（如有）、样本类型（样本来源、造血恢复情况）以及阳性或阴性检测结果的预期临床用途。例如在许多研究中，对于首次完全缓解的AML患者，在血液或骨髓抽吸物DNA中检测到FLT3-ITD与复发和死亡风险增加相关。虽然使用来自同一患者同一时间点的配对样本来源进行的直接比较研究有限，但两项针对成人AML患者大规模队列的最新研究显示，在使用相同的高灵敏度检测方法进行移植前检测时，血液中的FLT3-ITD MRD阳性率为33%，而骨髓中为46%。骨髓样本平均可能具有更高的FLT3-ITD负荷，这为阴性结果提供了更大的可信度。然而正如在突变NPM1 MRD中所见，在治疗期间检测骨髓可能会比检测血液识别出更多的阳性患者，但代价是临床假阳性率更高，尤其是在完成两个周期强化治疗之前进行检测时。FLT3-ITD NGS-MRD检测应针对其特定的临床应用场景进行验证。

除了这些里程碑式的时间点评估外，支持选择监测性监测的最佳时机或样本来源的证据仍然有限。然而，FLT3-ITD检测不应是唯一的MRD监测方式。对于初诊时同时存在FLT3-ITD和NPM1突变的患者，可考虑将突变NPM1 MRD监测作为疾病状态的指导。在复发风险最高的时期，连续评估流式细胞术可能提供有用信息。

对于接受低强度或靶向维持治疗的AML患者，FLT3-ITD NGS-MRD检测的最佳方法仍有待确定。

鉴于FLT3-ITD AML复发的快速动力学，以及需要MRD检测结果来指导临床决策，要求从收到样本到报告结果的周转时间尽可能短，且不超过三周。与成本、批量大小和检测报销相关的问题超出了本指南的范围；但应认识到，FLT3-ITD NGS-MRD检测应能够在患者整个病程中重复使用，以识别即将复发的患者并为管理决策提供信息。

参考文献

Blood . 2026 Jun 3:blood.2026033569. doi: 10.1182/blood.2026033569.

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